視頻標簽：DNA重組技術(shù)

所屬欄目：高中生物優(yōu)質(zhì)課視頻

視頻課題：人教版生物選修三1.1DNA重組技術(shù)的基本工具_黑龍江 - 七臺河

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人教版生物選修三1.1DNA重組技術(shù)的基本工具_黑龍江 - 七臺河

     DNA重組技術(shù)基本工具的教學(xué)設(shè)計 
                       七臺河市第一中學(xué)  生物   全維麗    設(shè)計思路  
1．教學(xué)模式：《1235教學(xué)模式》一即一個核心，以學(xué)習(xí)目標為核心，二即二個轉(zhuǎn)變，轉(zhuǎn)變教師教學(xué)行為，轉(zhuǎn)變學(xué)生學(xué)習(xí)方式，三即三個體現(xiàn)，課堂體現(xiàn)目標引領(lǐng)，體現(xiàn)任務(wù)驅(qū)動，體現(xiàn)效果評價。把學(xué)習(xí)目標落實到課堂每一個過程中，全程循序漸進、有效調(diào)控，五即五個環(huán)節(jié)，它們分別是導(dǎo)、讀、研、評、拓。 
2．理論依據(jù)：多給學(xué)生權(quán)利讓學(xué)生自主去選擇,多給學(xué)生機會讓學(xué)生自己去體驗多給學(xué)生困難讓學(xué)生想辦法去解決,多給學(xué)生條件讓她們體驗創(chuàng)造的樂趣,模擬探究教學(xué)法；問題生成法。 
3.設(shè)計特色：針對重點難點對教學(xué)內(nèi)容進行結(jié)構(gòu)化處理，并與基因工程的實際操作練習(xí)起來；在模擬探究的過程中不斷生成問題，引導(dǎo)學(xué)生依據(jù)載體的特點，按照相似性原理，選擇和建立模型，進而對模型進行“剪”與“連”等操作，并分析操作結(jié)果。 
教學(xué)分析 1．教材分析 
重點：DNA重組技術(shù)的三種基本工具 難點：載體的特點及應(yīng)用 2．學(xué)情分析 
DNA重組技術(shù)基本工具在實際應(yīng)用中如何發(fā)揮作用，是非常抽象的內(nèi)容，僅僅靠學(xué)生的想象，很難真正理解并融會貫通；同時，中學(xué)生的心理發(fā)育特點，決定了他們更樂于通過實際動手操作來解決遇到的問題，同時對自己新發(fā)現(xiàn)的問題有更加強烈的探究欲望。 
3．教學(xué)條件分析 
對于本節(jié)課的教學(xué)設(shè)計而言，需要如下教學(xué)條件：電腦，投影儀，彩色復(fù)印紙，剪刀，雙面膠。幾乎所有省市級示范高中學(xué)校的教學(xué)條件都可以滿足本節(jié)課的要求 
教學(xué)目標 
1.了解基因工程的基本概念，能夠用自己的話清楚表述。 
2.清楚基因操作的工具，能夠說出每一種操作工具的特點及用途。 通過動手操作、小組合作，提高學(xué)生自主學(xué)習(xí)及合作探究的能力。 教學(xué)策略與手段 
教學(xué)模式：探究式教學(xué)，通過創(chuàng)設(shè)問題情境，在分析問題、解決問題的過程中不斷生成一系列新的問題，培養(yǎng)學(xué)生的自學(xué)能力，以及探究和思維能力。 
教學(xué)策略：利用教學(xué)多媒體，自制教具，使抽象的問題形象化，引導(dǎo)學(xué)生自主動手操作，解決每一程序中的技術(shù)難點和重點。 
教學(xué)手段：PPT，自制教具，投影儀等綜合教學(xué)輔助工具。本節(jié)課模擬探究的是載體與目的基因的連接，所以將教材提供的堿基序列加以調(diào)整，用彩色打印紙打印        
教學(xué)過程： 
 



（一）回顧舊知，引入新課 
教師的組織和引導(dǎo) 
學(xué)生活動 
教學(xué)意圖 
（一）導(dǎo)入新課：利用多媒體播放新聞聯(lián)播(轉(zhuǎn)基因三文魚上餐桌)。  
（二）出示學(xué)習(xí)目標及重難點  
（三）通過自主學(xué)習(xí)讓學(xué)生檢測預(yù)習(xí)情況： 
1. 基因工程的概念及其要點？(識記) 2. 基因工程中分子手術(shù)刀的名稱？有多
少種？這類酶主要來源于哪里？切割哪種化學(xué)鍵？（識記） 
3. 限制酶的作用結(jié)果是什么？識別序列
有什么特點？（應(yīng)用） 
4. 基因針線或分子縫合針的名稱？常見
的有哪幾種？作用上的區(qū)別？（識記） 5. 質(zhì)粒是什么？質(zhì)粒做載體必須滿足哪
些條件？（理解） 
6. 基因工程常用的運載體有哪些？（闡
明） 
學(xué)生獨立完成問題1和問題2后教師拓展補充：限制酶的識別序列及作用結(jié)果及強調(diào)學(xué)案上易錯內(nèi)容。 
  活動一：用剪刀動手剪切給定的限制酶的識別序列總結(jié)酶識別序列的特點 
  通過活動總結(jié)限制酶的識別序列特點完成問題3    
  拓展：DNA連接酶與DNA聚合酶的區(qū)別與聯(lián)系？    活動二：模擬制作——重組DNA的構(gòu)建 
利用PPT給學(xué)生分別呈現(xiàn)限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI，BamHI識別的堿基序列和酶切位點，酶切過程以及DNA連接酶的作用位點。  
給學(xué)生分發(fā)教具：每組發(fā)四個帶堿基序列的環(huán)狀DNA，兩張鏈狀DNA，（且四
個DNA上僅有EcoRI的酶切位點），剪刀，膠帶。  
學(xué)生首先動手模擬得到EcoRI酶切后的載體和目的基因。 
讓學(xué)生觀察并思考：如果條件充分，   
 學(xué)生閱讀   
學(xué)生閱讀教材思考并回答      
教材有的學(xué)案有的學(xué)生獨立完成，學(xué)生答得不完全的其他學(xué)生補充，教師適當(dāng)點撥      
學(xué)生觀看動畫理解限制酶的作用特點  
學(xué)生獨立動手 
引導(dǎo)學(xué)生總結(jié)限制酶的識別序列特點及回文序列  
學(xué)生結(jié)合教材獨立完成問題4 學(xué)生依據(jù)所給表格完成，學(xué)生答補全的教師適當(dāng)點撥  
學(xué)生結(jié)合教材獨立完成問題5  
學(xué)生觀察。 
學(xué)生動手操作，模擬重組DNA，探究載體的特點。  
思考，討論，得出結(jié)論。 思考，討論，動手操作，得出
結(jié)論。 
學(xué)生們除得到載體與目的基因之間的連接外，還有載體與載體之間的連接，目的基因與目的基因
之間的連接，以及載體自身環(huán)化，通過觀看新聞聯(lián)播，調(diào)動學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，導(dǎo)入課題。  （體現(xiàn)1235教學(xué)模式的導(dǎo)）  
 明確目標及重難點   
以問題串的形式層層遞進學(xué)生閱讀教材獨立完成 
（體現(xiàn)1235教學(xué)模式的讀）  
探究式教學(xué)，通過創(chuàng)設(shè)問題情境，在分析問題、解決問題的過程中不斷生成一系列新的問題，培養(yǎng)學(xué)生的自學(xué)能力，以及探究和思維能力。  
培養(yǎng)學(xué)生獨立思考能力和動手能力     
引出本節(jié)課的重難點：DNA重組技術(shù)的模擬操作。   
讓學(xué)生準確理解切割或連接部位。  
在實際動手操作的過程中發(fā)現(xiàn)問題，解決問題。  
通過動手模擬操作，以及思考和討論，使所學(xué)知識逐步深
入，并把記憶中的知
 



此時我們得到的目的基因和載體是否能夠成功連接？ 
繼續(xù)提出問題： 
將多個EcoRI酶切后的載體與目的基因混合后，加入DNA連接酶，其連接產(chǎn)物可能有哪些種？請大家嘗試操作。 
提出第二個問題：為什么會出現(xiàn)這么多種連接產(chǎn)物呢？  
各小組挑出本組制作的載體與目的基因連接后的重組DNA，互相觀察并比較是否有不同。 
提出第三個問題：我們?nèi)绾谓鉀Q目的基因定向插入這個問題呢？ 
在這個過程中提醒學(xué)生：載體的特點之一是有多個不同的酶切位點。  分發(fā)另一套材料，每組兩個環(huán)狀DNA，兩個鏈狀DNA（都帶EcoRI，BamHI兩種酶切序列），讓學(xué)生再次模擬操作。 
給學(xué)生展示PPT，通過圖片和視頻使學(xué)生發(fā)現(xiàn)載體的特點中除有多個酶切位點外，還攜帶有標記基因（如氨芐青霉素抗性基因），標記基因可以參與鑒別受體細胞中是否含有目的基因。 
提出第四個問題：前面操作中，載體與載體重組得到的DNA，載體與目的基因重組得到的DNA上都有標記基因（如氨芐青霉素抗性基因），如何篩選出含目的基因的重組DNA呢？（這個問題難度較高，適合能力較強的同學(xué)） 
如果學(xué)生未得到準確的結(jié)論，提示他們：在基因工程的實際操作中，科學(xué)家選擇的載體往往含兩個或更多的標記基因。 利用PPT呈現(xiàn)：環(huán)狀DNA載體以及上面的兩個標記基因。   學(xué)生獨立完成問題6后教師拓展延伸： 基因工程得以實現(xiàn)的理論基礎(chǔ)？   教師引導(dǎo)學(xué)生思考后得出1.ＤＮＡ分子結(jié)構(gòu)相似2．所有生物共用一套密碼子  目標回饋總結(jié)：出示目標  和目的基因自身環(huán)化等。其中載體及目的基因的自身環(huán)化是干擾重組的常見因素。  
思考，討論。學(xué)生們觀察，討
論后提出，一種限制性核酸內(nèi)切酶切割后產(chǎn)生的黏性末端只有一種，相同的黏性末端之間可以任意連接。 
在這些連接產(chǎn)物中，我們需要的是載體與目的基因連接而成的重組DNA。 
觀察比較。  學(xué)生討論。  模擬操作。  
剪切后，學(xué)生們觀察發(fā)現(xiàn)，兩種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是
不同的，雖然載體與載體間，目的基因與目的基因間仍會連接，但載體及目的基因自身環(huán)化問題得到解決，根據(jù)堿基互補配對原則，目的基因與載體連接的方向是唯一的。這樣，通過模擬操作，學(xué)生們解決了剛才所提出的問題，得出結(jié)論：載體上含有多個酶切位點，利用雙酶切的方法，可以保證目的基因的定向插入，同時還避免了載體及目的基因的自身環(huán)化，提高DNA重組率，實現(xiàn)目的基因的正確轉(zhuǎn)錄
和表達。 
觀察，思考。 
學(xué)生通過討論，設(shè)計，提出如果將一個標記基因放在目的基因的插入位置，當(dāng)目的基因插入時，這個標記基因?qū)⒈黄茐亩鵁o法表達，從而達到篩選的目的。 
  
學(xué)生閱讀教材獨立完成問題6 
 
學(xué)生思考后回答 
 
 
學(xué)生結(jié)合目標畫出思維導(dǎo)圖 
 
識轉(zhuǎn)變?yōu)閷嶋H中的能力。  
學(xué)生通過比較，能夠發(fā)現(xiàn)有的小組目
的基因插入方向與別組有不同，從而發(fā)現(xiàn)目的基因不同的插入方向?qū)��?dǎo)致出現(xiàn)不同的基因產(chǎn)物。 
通過思考，部分學(xué)生能夠提出用兩種限制酶切割載體，從而使切口處的黏性末端不同的思路。  
通過層層深入的問題，逐步突出重點，突破難點，學(xué)生們發(fā)現(xiàn)科學(xué)實踐的過程遠非理論記憶那么簡單。課堂上的模擬重組可以大大降低空間想象的難度，使抽象的內(nèi)容直觀化。 
利用具體直觀的信息媒體使學(xué)生對抽
象的內(nèi)容直觀化。  
引導(dǎo)學(xué)生從基因工程的整體思考問
題。  
學(xué)生通過類比發(fā)現(xiàn)：多個酶切位點，多個標記基因，插入失活
的篩選方法是基因工程中的重要設(shè)計思
路，理解了基因工程中使用的載體往往是人工合成的，并真正懂得了實踐是檢驗真理的唯一標準    檢驗?zāi)繕送瓿汕闆r 



高考鏈接  圖片結(jié)課 
學(xué)生完成學(xué)案上2013年高考題 
課后反思 
1．強化了知識傳授的同時，更注重了對學(xué)生能力的培養(yǎng)。 
在強化了核心概念和基本原理知識傳授的同時，更注重了對學(xué)生能力的培養(yǎng)。如通過學(xué)案導(dǎo)學(xué)，布置學(xué)生帶著任務(wù)自學(xué)教材等方式培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)能力；通過閱讀教材以及學(xué)案上的材料，培養(yǎng)學(xué)生獲取信息的能力；通過模型構(gòu)建，培養(yǎng)學(xué)生動手能力、交流合作能力；通過動畫、圖片等直觀教學(xué)手段，培養(yǎng)學(xué)生的觀察能力以及對圖形的分析、描述能力。 
2．對教材內(nèi)容進行了適當(dāng)?shù)?ldquo;調(diào)序”和“改進”。 
新課程改革要求教師從“教教材”走向“用教材教”。這節(jié)課中，根據(jù)學(xué)生的實際情況對教材部分內(nèi)容進行了“調(diào)序”和“改進”。首先筆者將三種基因工程工具的呈現(xiàn)先后順序進行了調(diào)整，將“基因載體”和“DNA連接酶”的順序進行了調(diào)換，這樣更符合邏輯關(guān)系，也更容易為學(xué)生所接受；另外筆者將重組DNA模擬制作的材料進行了改進，將紅綠兩色的硬紙板更換為紅白兩色的紙條，并將紅色紙條兩端用固體膠連接起來，形成一個紙環(huán)。如此改進有以下優(yōu)點：質(zhì)粒是最常用的基因載體，用紙環(huán)來代表質(zhì)粒，既簡單形象又緊貼教材；兩色紙張比紙板容易得到，而且更易用剪刀剪裁。 
3．直觀教學(xué)手段、模型構(gòu)建，有效的突破了重難點。 
本節(jié)課中，將限制酶切割DNA、DNA連接酶將基因載體和目的基因連接起來等抽象的、微觀的過程通過動畫和圖片展現(xiàn)出來，減輕了學(xué)生掌握這些知識的阻力，激發(fā)了學(xué)習(xí)積極性，使學(xué)生在輕松愉快的氛圍中突破了重難點；通過重組DNA的模擬制作，鞏固了本節(jié)課中所學(xué)的內(nèi)容，使學(xué)生對基因工程的三種工具的功能特點有更深層次的理解，同時還培養(yǎng)了學(xué)生的動手能力，強化了交流合作意識。 
4．以問誘思，任務(wù)驅(qū)動。 
 



在本節(jié)課的每一個環(huán)節(jié)中，都通過學(xué)案設(shè)置了問題串，使學(xué)生帶著任務(wù)自學(xué)教材，提高了學(xué)習(xí)效率；這些問題的設(shè)置也能使得教學(xué)過程銜接和過渡順暢自然，問題設(shè)置依據(jù)了學(xué)生的認知規(guī)律和原有的知識掌握情況，并且問題設(shè)置難度呈階梯型特點，符合學(xué)生“最近發(fā)展區(qū)”，真正“面對每一位學(xué)生”，讓每一位學(xué)生都能體驗和享受成功的愉悅；另外通過情境引導(dǎo)學(xué)生自己提出問題，并自己嘗試解決，讓學(xué)生親身體驗和感受科學(xué)探究過程，最終提高生物科學(xué)素養(yǎng)。 
5．強化了新舊知識的融合，及時更新了學(xué)生的知識結(jié)構(gòu)。 
構(gòu)建主義理論認為，教師的作用不是簡單的將書本上的知識傳遞給學(xué)生，而應(yīng)該創(chuàng)設(shè)相應(yīng)的學(xué)習(xí)情境，使學(xué)生能夠?qū)W會自己開展探究活動，建構(gòu)知識，并能將知識與自己原有的知識經(jīng)驗融合，納入已有的知識結(jié)構(gòu)中。必修中學(xué)習(xí)過的很多知識與本節(jié)內(nèi)容有密切關(guān)系，如DNA的結(jié)構(gòu)、酶的專一性、基因操作的三種工具的基本知識。在教學(xué)過程中，筆者通過設(shè)置問題情境激活學(xué)生已有的知識經(jīng)驗，并引導(dǎo)學(xué)生對新舊知識之間的同異進行分析比較，通過抽象和概括以形成新概念，從而使新舊知識融合為知識的體系。 
6．反思不足，及時改進。 
在本節(jié)課的教學(xué)中，還存在一些不足之處。例如，由于時間分配不合理，導(dǎo)致在某些問題上，學(xué)生自學(xué)、討論不很充分；課前預(yù)習(xí)完成不好，部分學(xué)生難以跟上老師的節(jié)奏；重組DNA的模擬制作是本節(jié)課的一大亮點，學(xué)生活動效果也比較好，但是筆者對學(xué)生活動的評價還顯得不夠深入。因此，如何解決上述問題，打造真正的高效課堂是今后要著重思考的問題。

            高二生物學(xué)案
 
 選修三第一章第一節(jié) DNA重組技術(shù)的基本工具—探究案
【學(xué)習(xí)目標】1.了解基因工程的概念并掌握其要點 2.區(qū)別各種限制酶和DNA連接酶的種類及作用
            3.概述基因工程中運載體的種類并理解其必須具備的條件
【學(xué)習(xí)課時】1課時
【學(xué)習(xí)過程】
一、限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”
（一）溫故知新——DNA的結(jié)構(gòu)
請根據(jù)所學(xué)的知識，完善DNA分子的結(jié)構(gòu)圖：
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
（二）重難點突破1——合作探究限制酶的作用
結(jié)合給定限制酶的識別序列及其切割位點，并嘗試模擬限制酶將DNA片段切開，并記錄切割結(jié)果探究。
提示:1. 大家認真觀察幾個未被限制酶切割的DNA片段結(jié)構(gòu)，你能從中得到怎樣的結(jié)論？
 
2. 大家認真觀察幾個DNA片段被對應(yīng)限制酶切割后的結(jié)構(gòu)，你能從中得到怎樣的結(jié)論？
 
 
 
二、DNA連接酶——“分子縫合針”
（一）基本知識框架
 
 
 
 
 
（二）DNA連接酶與DNA聚合酶的作用比較

比較項目		DNA連接酶	DNA聚合酶
相同點
不同點	是否需要模板
	作用對象
	作用結(jié)果
	用途

三、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車” 
（一）載體種類   1、質(zhì)粒  質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細菌擬核DNA之外，具有             能力的很小的                 狀DNA分子。 
 2、            衍生物     3、            病毒     
（二）重難點突破2——合作探究基因工程載體需要具備的條件
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
四、 小結(jié)：畫出DNA重組技術(shù)的基本工具的思維導(dǎo)圖
 
 
 
 
 
 
 
   高二生物學(xué)案
 
 選修三第一章第一節(jié) DNA重組技術(shù)的基本工具—課后訓(xùn)練案
一選擇題
1．關(guān)于限制酶的說法中，正確的是
A．限制酶是一種酶，只識別GAATTC堿基序列        B．EcoRI切割的是G—A之間的氫鍵
C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA  D．限制酶只存在于原核生物中
2．限制酶是一種核酸切割酶，可辨識并切割DNA分子上特定的核苷酸堿基序列。下圖為四種限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨識序列。箭頭表示每一種限制酶的特定切割部位，其中哪兩種限制酶所切割出來的DNA片段末端可以互補黏合？其正確的末端互補序列為何？ 
 
A．BamHI和EcoRI；末端互補序列—AATT— B．BamHI和HindⅢ；末端互補序列—GATC—
C．EcoRI和HindⅢ；末端互補序列—AATT—   D．BamHI和BglII；末端互補序列—GATC—
3．下列關(guān)于DNA連接酶的敘述中，正確的是                          
A．DNA連接酶連接的是兩條鏈堿基對之間的氫鍵
B．DNA連接酶連接的是黏性末端兩條鏈主鏈上的磷酸和脫氧核糖
C．DNA連接酶連接的是黏性末端兩條鏈主鏈上的磷酸和核糖  D．同一種DNA連接酶可以切出不同的黏性末端
4．DNA連接酶催化的反應(yīng)是 
A．DNA復(fù)制時母鏈與子鏈之間形成氫鍵  B．黏性末端堿基之間形成氫鍵
C．兩個DNA片段黏性末端之間的縫隙的連接      D．A、B、C都不正確
5．在受體細胞中能檢測出目的基因是因為 
A．目的基因上有標記            B．質(zhì)粒具有某些標記基因
  C．重組質(zhì)粒能夠復(fù)制            D．以上都不正確
6．關(guān)于質(zhì)粒的敘述正確的是 
A．質(zhì)粒是能夠自我復(fù)制的環(huán)狀DNA分子   B．質(zhì)粒是唯一的載體
C．重組質(zhì)粒是目的基因                   D．質(zhì)�？稍谒拗魍鈫为殢�(fù)制
7．基因工程中可用作載體的是 
①質(zhì)粒 ②噬菌體 ③病毒 ④動物細胞核
A．①②③     B．①②④     C．②③④     D．①③④
8．下列黏性未端屬于同一限制酶切割而成的是 
 
 
A．①②        B．①③       C．①④       D．②③
9．下列關(guān)于各種酶作用的敘述，不正確的是
A．DNA連接酶能使不同脫氧核苷酸的磷酸與脫氧核糖連接
B．RNA聚合酶能與基因的特定位點結(jié)合，催化遺傳信息的轉(zhuǎn)錄
C．一種DNA限制酶能識別多種核苷酸序列，切割出多種目的基因
D．胰蛋白酶能作用于離體的動物組織，使其分散成單個細胞
二：限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因兩側(cè)各有一個酶Ⅱ的切點。
（1）請畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
 
 
 
 
（2）請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
 
 
 
 
（3）在DNA連接酶作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？為什么？

      高二生物學(xué)案
 
 DNA重組技術(shù)的基本工具學(xué)案
     選修三第一章第一節(jié) DNA重組技術(shù)的基本工具—課前預(yù)習(xí)案
學(xué)習(xí)目標：
①簡單描述基因工程的概念及目的。 
②說出DNA重組技術(shù)的三個工具及各工具的特點和用途。
③利用DNA重組技術(shù)的工具解答有關(guān)題目。
學(xué)習(xí)重點：DNA 重組技術(shù)所需要的三種基本工具的作用；
學(xué)習(xí)難點：基因工程載體需要具備的條件
【相關(guān)知識回顧】
基因：
（1）基因的本質(zhì)       （2）基因與DNA的關(guān)系      （3）基因與染色體的關(guān)系         
（4）基因與性狀（蛋白質(zhì)）的關(guān)系（5）相關(guān)概念： 顯性基因  隱性基因   等位基因
【課前預(yù)習(xí)案】
1、基因工程的原理：基因工程是指按照人們的愿望，進行嚴格的設(shè)計，通過體外 和 ，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在 水平上進行設(shè)計和施工的，因此又叫做 。
2、限制性核酸內(nèi)切酶
（1）切割DNA的工具是 ，又稱 。
（2）這類酶的主要來源是                                        。
（3）這類酶在生物體內(nèi)能將外來的DNA切斷，即能夠限制異源DNA的侵入并使之失去活力，但對自己的DNA卻無損害作用，這樣可以保持細胞原有的遺傳信息。
（4）由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進行的，故名限制性核酸內(nèi)切酶（簡稱限制酶）。
（5）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種＿＿＿＿的核苷酸序列，并且使每一條鏈中＿＿＿部位的兩個核苷酸之間的＿＿＿＿＿＿＿斷開，因此具有＿＿＿＿性。
（6）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿。
例1、下列關(guān)于限制酶的說法正確的是（    ）
A、限制酶廣泛存在于各種生物中，但微生物中很少
B、一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列
C、不同的限制酶切割DNA后都會形成黏性末端
D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氫鍵
3、DNA連接酶——“分子縫合針”
（1）根據(jù)DNA連接酶的來源不同，可以將它分為兩類：
一類是從大腸桿菌中分離得到的，稱為DNA連接酶。DNA連接酶只能將 連接起來，不能將雙鏈DNA片段平末端之間進行連接。
另一類是從 分離出來的，稱為T₄DNA連接酶。T₄DNA連接酶既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補的 ，又可以“縫合”雙鏈DNA片段的 ，但連接 之間的效率比較低。
（2）與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將＿＿＿＿＿＿＿加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接＿＿＿＿＿＿＿＿＿的末端，形成磷酸二酯鍵。例2、下圖為DNA分子的切割和連接過程。
 
(1)EcoRI是一種 酶，其識別序列是 ，切割位點是 與 之間的 鍵。切割結(jié)果產(chǎn)生的DNA片段末端形式為 。
(2)不同來源DNA片段結(jié)合，在這里需要的酶應(yīng)是 連接酶，此酶的作用是在 與 之間形成 鍵，而起“縫合”作用的。還有一種連接平末端的連接酶是 。
  4、基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車”
（1）基因操作過程中使用載體兩個目的：一是用它作為運載工具，將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細胞中去；二是利用它在宿主細胞內(nèi)對目的基因進行大量的復(fù)制。
（2）現(xiàn)在通常使用的載體是 ，它是一種相對分子質(zhì)量較小、獨立于擬核DNA之外的環(huán)狀DNA，有的細菌中有一個，有的細菌中有多個。
（3）質(zhì)粒通過細菌間的接合由一個細菌向另一個細菌轉(zhuǎn)移，可以 復(fù)制，也可整合細菌擬核DNA中，隨著擬核DNA的復(fù)制而復(fù)制。
（4）其他載體還有 和 等。
（5）作為載體必須具備以下條件：
能夠在宿主細胞中復(fù)制并穩(wěn)定地保存，具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接；具有某些標記基因，便于進行篩選，如對抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因等。
例3、以下是兩種限制酶切割后形成的DNA片段，分析回答問題。
 
(1)其中①和 是由一種限制酶切割形成的 末端，兩者要重組成一個DNA分子，所用DNA連接酶通常是 。
(2) 和 是由另一種限制酶切割形成的 末端，兩者要形成重組DNA片段，所用DNA連接酶通常是 。    

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